小芯片让五种植物病毒快速“现形”

　　在15分钟内可读全部检测结果，相较于传统检测一个病毒的十几个小时，大大缩短了检测时间，提高了检测效率。

　　2010年12月21日，在北京检验检疫局承担的国家质检总局科技计划项目《植物病毒蛋白芯片检测技术研究》专家验收会上，项目组研发的可同时检测香石竹斑驳病毒、黄瓜绿斑驳病毒、烟草脆裂病毒、百合无症病毒和番茄斑萎病毒五种检疫性植物病毒的五联卡硝酸纤维素膜单抗检测蛋白芯片，在15分钟内即可读全部检测结果，相较于传统检测一个病毒的十几个小时，大大缩短了检测时间，提高了检测效率。此科研成果引起了专家高度重视。

　　资料显示，植物感染病毒后，对植物细胞的影响与动物病毒一样，会打乱植物细胞的正常代谢活动，使植物的生长和发育遭到破坏，从而降低农作物的产量和品质。番茄斑萎病毒、烟草脆裂病毒、黄瓜绿斑驳病毒、香石竹斑驳病毒、百合无症病毒都能造成蔬菜、花卉等重要经济作物的损失，其中番茄斑萎病毒、黄瓜绿斑驳病毒是重要外来检疫对象，其余3种病毒由于其危害重大，在国内和各省区之间也列为重要防疫对象。据统计，每年由于病毒病的危害，全世界的粮食损失达200亿美元。病毒通常造成退绿、矮化、畸形等症状。由于病毒是专性寄生物，至今仍缺乏具有选择性的高效治疗药剂，使病毒病日益严重，成为当前农业生产中的一类重要病害。所以，在口岸检测中起阻断、隔离的植物检疫就是最好的防治手段。

　　北京检验检疫局《植物病毒蛋白芯片检测技术研究》项目组研究制备了上述5种病毒的单克隆抗体细胞株的单克隆抗体和多克隆抗体，并拥有了自主知识产权。该项目组负责人北京检验检疫局检验检疫技术中心副主任汪万春介绍，为方便使用，项目组同时研发了五联卡硝酸纤维素膜单抗检测蛋白芯片。相较于同类研究采用玻璃等基质制备芯片，硝酸纤维素膜基质的使用降低了制备工艺难度和应用对设备的依赖性；用硝酸纤维素膜为材料的蛋白芯片的基质；用金颗粒标记抗体；玻璃纤维素膜制备金标垫；检测灵敏多克隆抗体作为标记抗体，单克隆抗体作为检测抗体组装芯片，相较于只用多克隆抗体作为检测抗体，显著地提高了检测特异性；五种病毒同时检测，检测结果15分钟内可读，相较于传统检测一个病毒的十几个小时，缩短了检测时间，大大提高了检测效率。

　　验收会上，专家们审查了项目组提交的相关资料，听取了项目组的工作报告和技术报告，并进行了质询。参会专家对项目组的研究工作给予了充分的肯定。专家们一致认为：该项目试验设计合理，方法科学，数据翔实，资料齐全，结果可靠，完成了计划任务书规定的研究内容，达到国际先进水平，一致同意项目通过鉴定，并建议尽快推广应用。

　　汪万春还介绍说，该项目组根据研究成果申请了两项国家发明专利；在《INDIANJOURNALOFVIROLOGY》发表SCI研究论文1篇；制定了《番茄斑萎病毒、烟草脆裂病毒、黄瓜绿斑驳病毒、香石竹斑驳病毒、百合无症病毒快速筛选检测蛋白芯片法》行业标准1项，目前正在系统内征求意见。

　　目前，检测植物病毒的方法主要采用进口抗血清检测试剂盒进行酶联免疫吸附测定（ELISA）以及用电镜直接观察组织中的病毒粒子。从已有报道看，目前国内外对血清学检测方法均基于多抗血清而建立的，商品ELISA检测试剂盒也多是多抗血清，然而多克隆抗体存在非特异性高、准确性和均质性差、产量有限等不足，难以满足日益增长检测需求；电镜检测需要昂贵的设备而不能普及应用。因而迫切需要建立快速、准确、简便的检测方法，为病毒病的诊断提供技术支持。为此，本项目利用五种病毒的抗原免疫小鼠和大白兔，制备了五种病毒的单、多克隆抗体，开展了检测五种病毒的技术研究，开发了蛋白芯片，为五种病毒的田间检测及进出口检疫提供技术支撑和快速的检测方法和产品。

来源：中国国门时报

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