复方丹参滴丸对高脂血症大鼠血小板功能的影响

目的分析高脂血症大鼠血小板功能的变化，探讨复方丹参滴丸对高脂大鼠血小板功能的影响。

方法44只Wistar大鼠随机分为正常对照组、高脂模型组、复方丹参滴丸组[160mg/kg·d]、阿托伐他汀组[10mg/kg·d]，分组干预4周后检测血脂水平:总胆固醇CHO、甘油三酯TG、低密度脂蛋白胆固醇LDL-C、高密度脂蛋白胆固醇HDL-C的水平。应用酶联免疫法测定血小板表面α-颗粒膜糖蛋白CD62P的浓度，流式细胞术FCM检测血浆α颗粒膜蛋白-140GMP140浓度。

结果高脂血症组CHO、LDL-C显著升高;CD62P及GMP140水平明显升高；复方丹参滴丸组和阿托伐他汀组GMP140及CD62P水平显著降低。

结论高脂血症能够促使血小板活化，复方丹参滴丸具有与阿托伐他汀效果相似的抑制血小板活化的作用。

高脂血症是心脑血管疾病的重要危险因素，血小板活化在血液黏度增高、血栓形成，以及动脉粥样硬化的发生发展过程中起重要作用。血小板表面α-颗粒膜糖蛋白CD62P及血浆α颗粒膜蛋白-140GMP140水平反应血小板活化功能，是血小板活化的标志物，能特异地与活化血小板结合。我们通过对高脂血症大鼠血小板功能的变化及复方丹参滴丸的干预研究，来评价复方丹参滴丸对于高脂血症大鼠血小板功能的影响，以期对临床有所帮助。

A材料与方法

动物及分组

Wistar大鼠44只，体重269～298g，购自中国医学科学院遗传研究所实验动物中心，合格证号:SCXK京2005-0013。适应性饲养1周后随机分组，正常对照组常规饲料喂养10只，高脂饲料组34只。高脂饲料配方:2%胆固醇、0.35%胆酸钠、0.3%丙基硫氧嘧啶、5%白糖、10%猪油、82.35%基础饲料。4周后高脂模型制造成功，随机分成3组:高脂对照组14只、复方丹参滴丸组10只、阿托伐他汀组10只，分别给予高脂饲料、复方丹参滴丸天士立公司原料药净膏160mg/kg·d、阿托伐他汀北京嘉林药业股份有限公司生产10mg/kg·d。除正常对照组外继续高脂喂养，复方丹参滴丸、阿托伐他汀溶于2mL蒸馏水中每天罐胃1次，其余组每天给予蒸馏水2mL罐胃，干预4周。高脂饲料组、阿托伐他汀组、复方丹参滴丸组各死亡1只，完成试验动物41只。

标本采集

在分组喂养前及高脂干预4周后，经内眦静脉取血进行血脂分析。药物干预4周后，各组经腹主动脉使用一次性采血针及负压真空采血管进行标本采集。前2mL进行血脂分析，中间1.5mL用1%多聚甲醛PFA1.5mL和3.8%枸橼酸钠0.3mL的负压抗凝管采血进行CD62P流式细胞仪FCM检测，最后2.0mL用EDTA抗凝管采血，分离血浆测定GMP140水平。

血脂的测量

血脂分析指标包括:胆固醇CHO、甘油三酯TG、高密度脂蛋白HDL-C、低密度脂蛋白LDL-C4项指标。上述指标在我院检验科生化室由专业检验师检测。全自动生化仪，型号:RX-2000，美国TECHNICON公司生产。

CD62P的流式细胞术分析

荧光标记抗体购自SANTACRUZBIOTECHNOLOGYINC公司，CD61PE批号:sc-7311和CD62PFITC批号:sc-8419。采血后全血静置固定20min后，取5μL标本加入CD61PE、CD62PFITC荧光标记单抗各5μL，室温孵育20min后，加PBS至1mL重悬，应用COULTER公司的BECKMANCOULTERDU800型FCM进行分析。用SSC-FSC散点图中找出血小板群R1、CD61PE/CD62PFITC散点图中画出血小板门及活化血小板。每份标本测定10000个血小板。对照管分别加入5μL羊抗兔IgGPE、羊抗兔IgGFITC作为对照。

GMP140测定

采血后分离血浆于-80℃冰箱冻存备用，应用太阳公司GMP140酶联免疫试剂盒，严格按照说明书进行测量。

B统计方法

所有数据以均数±标准差±s表示，应用SPSS11.5软件处理，两组之间均数比较应用t检验，多组间两两比较应用方差分析。

结果

基础体重及血脂水平分析

高脂干预之前，测定10只常规饲料组与随机抽取10只高脂饲料组大鼠的体重、血脂分析各指标无明显差别，即两组之间的基础资料具有可比性（见表1）。

高脂喂养4周后血脂水平分析

高脂喂养4周后，常规饲料组大鼠10只和随机抽取高脂饲料组大鼠16只进行血脂检测，CHO、TG、LDL-C水平明显升高、HDL-C/CHO明显降低，提示大鼠高脂模型制造成功（见表2）。

复方丹参滴丸干预组血脂水平、血浆GMP140及血小板表面CD62P水平分析

继续分组干预4周后检测血脂水平、GMP140、CD62P等指标。正常对照组、高脂对照组、复方丹参滴丸组、阿托伐他汀组TG及HDL-C水平未见明显差别P>0.05。高脂对照组CHO、LDL-C最高，HDL-C/CHO最低，GMP140、CD62P水平最高。说明高脂血症组血小板活化程度最高。阿托伐他汀组血脂指标明显改善的同时，GMP140、CD62P水平也明显降低。复方丹参滴丸组CHO、LDL-C、HDL-C/CHO与高脂血症组相比有改善的趋势，但尚未达到统计学显著性，但是GMP140、CD62P水平也明显下降（见表3）。

由表3进一步分析可见，与高脂血症组比较，复方丹参滴丸组与阿托伐他汀组GMP140、CD62P水平均明显降低，且两组之间无显著差别，而且复方丹参滴丸及阿托伐他汀组，CD62P水平达到正常对照组水平，说明复方丹参滴丸与阿托伐他汀组干预效果相似GMP140:P=0.501，CD62P:P=0.705。

C讨论

血脂异常、血小板活性增加和血管阻塞性并发症的危险性密切相关，在降脂的同时降低血小板活性在血栓性疾病的临床治疗和预防心脏事件的发生方面有着十分重要的意义。GMP140以血小板膜CD62P和血浆GMP140两种形式存在，是反映血小板活化最具有特异性的标志物。在血栓形成过程中，GMP140起始动作用，使血小板与中性粒细胞黏附、聚集，形成血栓。FCM检测CD62P表达是评价血小板活化功能较为准确的方法。本研究显示，高脂血症大鼠血浆GMP140水平和血小板CD62P表达明显增加，也说明高脂血症促进血小板的活化。

复方丹参滴丸虽然没有明显的降低血脂水平的作用，但能够显著降低高脂血症大鼠CD62P及GMP140的水平，而且降低的程度与阿托伐他汀相似，说明复方丹参滴丸抑制血小板活化的作用与血脂水平无关。不稳定心绞痛UA患者存在血小板活化及纤溶活性异常，表现为GMP140含量升高、组织型纤维蛋白溶酶原活化剂t-PA活性减低和PAI-1活性增高。复方丹参滴丸能使UA患者血浆GMP140含量明显降低，t-PA活性明显升高，说明复方丹参滴丸能有效抑制血小板活化反应，改善纤溶活性。有研究表明复方丹参滴丸对血小板聚集率抑制作用基本上等同于、甚至优于阿司匹林，而临床不良反应较阿司匹林少。

本研究显示:阿托伐他汀在显著降低CHO、LDL-C、提高HDL-C/CHO比值的同时，明显降低GMP140激CD62P水平，说明阿托伐他汀在有效调节脂代谢作用同时显著抑制血小板活性，与Spencer研究结果相同。

来源：医药经济报

　　版权及免责声明：凡本网所属版权作品，转载时须获得授权并注明来源“中国产业经济信息网”，违者本网将保留追究其相关法律责任的权力。凡转载文章，不代表本网观点和立场。版权事宜请联系：010-65363056。

延伸阅读