在流式实验中，除了配色和对照之外，我们还会经常遇到另一个棘手问题，那便是Fc效应——许多细胞表面表达的Fc受体，能够识别并结合抗体的Fc端，导致抗体被标记到非目标细胞上，造成了结果的不准确和不真实。
以兔抗为例，兔IgG作为我们最常用的抗体类型之一，其Fc段与人IgG1的Fc段氨基酸序列同源性很高，尤其FcγR结合区域：
图1 兔IgG与人IgG1 Fc段氨基酸序列比对
兔IgG很容易与人FcγR产生结合，我们通过亲和力测定实验(BLI法)发现，野生型兔IgG（Rabbit IgG-WT）与人Fc受体所有亚型均有强结合，二者间的亲和力基本和人IgG与人Fc受体一致：
图2 野生型兔IgG与人FcγR亲和力测定
因此我们在实验时，通常需要额外增加一个步骤：使用Fc受体封闭试剂来消除Fc效应（Fc block）。这一操作不仅增加了实验难度和成本，而且Fc受体封闭试剂的封闭效果也是参差不齐;比如我们最近采购的一个Fc受体封闭试剂，有一定封闭效果，但效果不尽如人意：
图3 Fc受体封闭试剂效果测试
有没有可能，找到一个从根源上解决Fc效应的好办法？
FcZero-rAb™新型骨架流式抗体正式上线！
针对以上研究痛点和难点，Proteintech的研发团队基于ABCE™单个B细胞抗体发现平台和FcZero™沉默技术平台开发了一系列的FcZero-rAb™新型骨架流式抗体，该系列创新产品采用了全新的抗体骨架，从根源上消除了由Fc受体结合引起的非特异性背景信号。
图4 FcZero-rAb™抗体的Fc沉默原理
相较于传统骨架流式抗体的先天不足，FcZero-rAb™新型骨架流式抗体突破了行业壁垒，具有FcZero™沉默技术平台带来的多重技术革新优势：① 完全消除Fc效应，②定点定量标记，③仅需一种同型对照，④高稳定性。
1. FcZero-rAb™抗体完全消除Fc效应
FcZero-rAb™新型骨架流式抗体的核心在于FcZero™沉默技术，Proteintech通过该技术在Rabbit IgG的Fc CH2区域进行关键氨基酸位点突变，屏蔽了抗体与Fc受体的结合，形成Fc silencing(Fc效应沉默)。
该技术完全消除了兔IgG的Fc段与人Fc受体的结合，包括FcγRI (CD64)、FcγRII (CD32) 和FcγRIII (CD16)等多种Fc受体。
图5 FcZero-rAb™IgG与人FcγR亲和力测定
通过FcZero-rAb™新型骨架流式抗体分析人PBMCs样本，我们可以看到，与传统流式抗体或者传统流式抗体+Fc受体封闭剂相比，FcZero-rAb™新型流式抗体背景更干净，分群更清晰。
图6 FcZero-rAb™抗体Fc沉默效果对比
2. FcZero-rAb™抗体定点定量标记
FcZero-rAb™新型骨架流式抗体采用了生物定点标记技术，每一个裸抗分子的Fc段都有两个明确标记位点，可以定点定量标记所需偶联物。
与市面上常用的化学随机标记相比，生物定点标记技术不仅能够保证偶联物远离抗体活性中心，仅在Fc末端而不影响抗体的抗原识别与结合能力，同时还能确保信号强度的均一性和批次间标记情况的重复性 。
图7 生物定点标记和化学随机标记效果对比
3. FcZero-rAb™抗体仅需一种同型对照
传统流式抗体即使来源于同一个物种，也可能有多个抗体亚型，比如小鼠IgG1、IgG2a、IgG2b和IgGM(下图右);而FcZero-rAb™新型骨架流式抗体全系列采用了同一种新型抗体骨架，仅需一种同型对照即可，不仅能够降低实验难度，还能有效节省成本。
图8 FcZero-rAb™抗体仅需一种同型对照
4. FcZero-rAb™抗体可长期稳定保存
针对FcZero-rAb™新型骨架流式抗体的全新骨架，经SEC-HPLC纯度分析、亲和力测定和流式实验检测，FcZero-rAb™新型骨架流式抗体在4℃保存1年之后，成分依旧单一稳定，具有高生物活性。
图9 FcZero-rAb™抗体热加速试验SEC-HPLC纯度分析
图10 FcZero-rAb™抗体热加速试验亲和力检测
图11 FcZero-rAb™抗体热加速试验流式检测
Uni-rAb™重组流式抗体同步上线！
FcZero-rAb™新型骨架流式抗体作为革命性的新型流式抗体，一方面是基于FcZero™沉默技术平台，另一方面则是依托ABCE™单个B细胞抗体发现平台 。
ABCE™单个B细胞抗体发现平台是Proteintech最新一代重组兔单克隆抗体开发平台，该平台所开发的Uni-rAb™重组兔单克隆抗体已于2024年6月上线，其“高质价比”快速赢得了大家的认可和喜爱。
如今，与FcZero-rAb™新型骨架流式抗体同步，Uni-rAb™传统骨架重组流式抗体也正式亮相，它采用的是野生型Rabbit IgG抗体骨架，二者间除抗体骨架存在差异之外，其他性质保持一致，均继承了Uni-rAb™重组兔单克隆抗体高特异性、高亲和力及高批次间一致性的优良传统。经充分测试，Uni-rAb™传统骨架重组流式抗体与经典克隆相比具有相似或更优越的性能。
图12 Uni-rAb™抗体(左)与其他品牌抗体对比(右)
Uni-rAb™传统骨架重组流式抗体能够兼容其他传统流式抗体体系，可作为流式实验的常规选择;FcZero-rAb™新型骨架流式抗体能够提供更高质量的支持，可完美屏蔽Fc效应干扰，拿到更真实更可靠的实验成果。二者可满足不同的实验场景需求。
作为专业抗体生产商，Proteintech在创新的道路上从未止步。
从兔多抗、鼠单抗、羊驼纳米抗体、重组兔单抗，到如今的FcZero-rAb™新型骨架流式抗体和Uni-rAb™传统骨架重组流式抗体，Proteintech持续创新，力争通过最先进的技术和工艺，给大家提供最优质的产品与服务，同时维持合理且更低的价格;让所有的科研工作者，都能享受到技术创新给大家带来的便利和助力。
这一次，基于最新平台和最新技术锻造的FcZero-rAb™新型骨架流式抗体和Uni-rAb™传统骨架重组流式抗体，希望能给大家带来全新的体验!
PS：除了产品研发技术的创新之外，Proteintech官网近期也将上线一个行业前所未有的创新功能，将通过3D结构展示每一个抗体与抗原的结合位点，并可根据所限定的序列区域选择最适配的抗体，敬请期待!
FcZero-rAb™新型骨架流式抗体列表
截止今日，Proteintech已经上线百余个FcZero-rAb™新型骨架流式抗体和千余个Uni-rAb™传统骨架重组流式抗体，前者目前可提供PE和APC两种标记，后者可提供9种配色，并且在ABCE™单个B细胞抗体发现平台的高通量加持下，每月都能上新大量新产品!
在此小P向各位老师发出诚挚邀请，欢迎体验我们创新技术带来的新一代重组流式抗体!添加微信号：JX1358874227或者关注ProteintechGroup官方公众号，即可申领试用装和新品优惠。
FcZero-rAb™新型骨架流式抗体列表
（新产品及新配色持续更新中）
转自：中国网
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